| 角色 | 饰演者 | 角色介绍 |
| 莱昂纳多 | 皮特·普劳泽克 | 莱昂纳多的名字来自意大利发明家和画家莱昂纳多·达芬奇，是乌龟兄弟里最冷静沉着的禅师。由于他是老大，因此最愿意承担责任。他身高6尺5寸，可以神准地挥舞他的武士钢刀。他承担了重担，内心不断挣扎：他必须拯救世界同时保卫弟弟们的安全！ |
| 拉斐尔 | 阿伦·瑞奇森 | |
| 艾蓓丽尔·奥尼尔 | 梅根·福克斯 | 美貌与智慧并重、性感与勇气齐飞的记者，与四只神龟联手将纽约从魔掌中拯救出来。 |
| 埃里克·萨克斯 | 威廉·菲德内尔 | |
| 米开朗基罗 | 诺尔·费舍 | 眼光独到的意大利画家和雕塑家米开朗基罗是乌龟小弟的命名灵感来源。米开朗基罗的个性无拘无束，爱玩到无法无天；他戴着橘色的面具，耍着双节棍，他会一边大啖披萨，一边用冲浪者的口气说话。他发明出不少最让人琅琅上口的口号，包括最常被引用的“卡哇邦嘎！ |
| 多纳泰罗 | 杰瑞米·霍华德 | 多纳泰罗的名字来自佛罗伦萨的雕塑家，他为世人留下了不朽的艺术作品。在四只忍者神龟中，他是聪明的科技通，身高6呎8吋也是最高的一个。他的特征是紫色面具和木制长棍，敏锐的脑袋永远动个不停。他是个孜孜不倦的数字发明家，忍者神龟所有最厉害的装备都是他做的。 |
| 弗恩·芬威克 | 威尔·阿奈特 | |
| Splinter | 丹尼·沃德本恩 | |
| BernadetteThompson | 乌比·戈德堡 | |
| IrmaLanginstein | 艾比·艾略特 | |
| Karai | MinaeNoji | |
| FemaleNewscaster | AmiSheth | |
| Dr.BaxterStockman | K.ToddFreeman | |
| TimesSquareTourist | 菲利普·奥唐戈 | |
| NYPDOfficer | DennisLauricella | |
| Pedestrian | PaulThornton | |
| 施莱德 | 水源士郎 |
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